Aplicación del análisis HPLC en evaporador rotatorio

La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) también se denomina cromatografía líquida de alta presión, cromatografía líquida de alta velocidad, cromatografía líquida de alta resolución y cromatografía en columna moderna. Es una tecnología de separación analítica rápida y eficiente desarrollada rápidamente en la década de 1970, y es un medio importante para las pruebas de separación modernas.

La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) utiliza líquido como fase móvil y adopta un sistema de infusión de alta presión para bombear la fase móvil, como un solo disolvente con diferentes polaridades o una mezcla de disolvente y solución tampón con diferentes proporciones, a la columna cromatográfica con fase estacionaria. Una vez separados los componentes de la columna, ingresan al detector para su detección y realizar el análisis de la muestra.

El mecanismo de separación de la cromatografía líquida de alto rendimiento es el mismo que el de la cromatografía en columna convencional, pero el empaquetamiento es más fino y debe ser impulsado por una bomba de alta presión, que tiene una alta eficiencia de columna y una rápida velocidad de análisis. A diferencia de la cromatografía de gases, la fase móvil en la cromatografía líquida también participa en el proceso de separación de componentes, y su composición, proporción y valor de pH se pueden ajustar de manera flexible, con varios modos de separación. En la práctica, el valor de retención y la selectividad de las muestras en la columna cromatográfica se ajustan cambiando la composición de la fase móvil, de modo que se puedan separar diferentes muestras.

 

Componentes del análisis HPLC

 

Columna: La columna es el componente principal del sistema HPLC, que se utiliza para separar los compuestos de la muestra. Las columnas de separación comunes incluyen columnas de fase inversa, columnas de intercambio iónico, columnas de filtración en gel, etc., y su selección depende de las propiedades del compuesto que se va a separar y del propósito del análisis.

Fase móvil: La fase móvil es una combinación de disolventes utilizados en HPLC para pasar una muestra a través de una columna de separación. La fase móvil generalmente consiste en una mezcla de solventes, que puede ser un solo solvente o una mezcla de múltiples solventes en una proporción determinada. Elegir el flujo apropiado es muy importante para el efecto de separación.

Bomba: La bomba se utiliza para proporcionar la fase móvil y empujarla a través de la columna de separación a una presión determinada. Las bombas comunes incluyen bomba de presión constante y bomba de gradiente. La bomba de gradiente puede realizar cambios lineales o no lineales en la composición de la fase móvil, para obtener un mejor efecto de separación.

Inyector: El inyector se utiliza para introducir la muestra a analizar en el sistema HPLC. El muestreador puede ser una jeringa operada manualmente o un muestreador automático. Por lo general, tienen las características de volumen preciso y buena repetibilidad para garantizar una inyección de muestra precisa.

Horno de columna: El horno de columna se utiliza para controlar la temperatura de la columna de separación. Al controlar la temperatura, se puede cambiar el coeficiente de distribución y la velocidad de separación de la muestra en la columna, optimizando así el efecto de separación.

Detector: El detector se utiliza para detectar el compuesto separado y generar una señal eléctrica relacionada con su concentración. Los detectores comunes incluyen el detector de absorción ultravioleta-visible, el detector de fluorescencia y el detector electroquímico. La elección del detector depende de las características del compuesto a analizar y de los requisitos de sensibilidad de detección.

Sistema de adquisición de datos: El sistema de adquisición de datos se utiliza para recibir, registrar y analizar las señales emitidas por el detector. Puede convertir la señal detectada en parámetros como el área del pico y el tiempo de retención, y proporcionar análisis e interpretación de los resultados.

 

Después de eliminar el disolvente medianteevaporador giratorio, la muestra obtenida suele ser concentrada o sólida. Si desea analizar o detectar más a fondo los compuestos en la muestra, puede analizarlos mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC).

Pasos generales para analizar muestras después de la evaporación rotatoria por HPLC

 

1. Disolución de la muestra: disolver la muestra después del rotavapor en un disolvente apropiado. Al seleccionar los disolventes se deben tener en cuenta la solubilidad de la sustancia a analizar y los requisitos de las condiciones de análisis de HPLC.

2. Preparación de la solución estándar: Si se necesita un análisis cuantitativo, se puede preparar la solución estándar del compuesto a analizar para la posterior corrección y cálculo de los resultados del análisis.

3. Realice un análisis de HPLC: inyecte la muestra en el sistema de HPLC y configure la columna de separación, la fase móvil y el detector adecuados. Según el propósito del análisis, seleccione los métodos y parámetros apropiados, como el caudal, la temperatura y el programa de gradiente.

4. Recopilación y análisis de datos: el cromatograma de la muestra se recopila mediante un sistema HPLC y el compuesto objetivo se cuantifica o identifica según el área del pico, el tiempo de retención u otros parámetros relacionados. Para el análisis cuantitativo se pueden utilizar el método de curva estándar y el método de estándar interno.

5. Interpretación de los resultados: Según los resultados del análisis, los compuestos de la muestra fueron evaluados cualitativa y cuantitativamente. Según las necesidades, puede generar informes o registrar resultados de análisis.

 

La aplicación de rotovap en el análisis HPLC tiene dos significados prácticos

 

• Concentración de la muestra: en algunos casos, la concentración de la muestra a analizar puede ser demasiado baja, por lo que se puede utilizar el rotavapor químico para concentrar la muestra y aumentar la sensibilidad de detección del analito en HPLC.
• Eliminación de disolventes: en algunas muestras, los disolventes pueden interferir con el análisis de HPLC, por lo que es necesario eliminar o reemplazar los disolventes de las muestras con disolventes adecuados para HPLC. El rotavapor de laboratorio puede ayudar a eliminar el disolvente y transformar la muestra en una forma adecuada para el análisis HPLC.

 

Análisis por HPLC yevaporador giratorioSon dos técnicas comúnmente utilizadas en el análisis químico y tienen algunas diferencias y conexiones en principio y aplicación.

 

Diferencia

 

Principio: La HPLC se basa en el principio de la cromatografía líquida, y la separación y el análisis cuantitativo se realizan mediante la interacción entre la fase estacionaria (columna) y la fase móvil (disolvente). El evaporador utiliza el principio de calentamiento y rotación para evaporar la muestra líquida rápidamente y eliminar el disolvente, a fin de concentrar la muestra o cambiar el entorno del disolvente de la muestra.

Campo de aplicación: La HPLC se usa ampliamente en química, farmacia, medio ambiente y otros campos, y puede usarse para la separación, identificación y análisis cuantitativo de compuestos en mezclas complejas; La evaporación rotatoria se utiliza principalmente en el proceso de concentración de muestras, eliminación de disolventes y preparación de muestras, y se utiliza comúnmente en síntesis orgánica, extracción de productos naturales, preparación de muestras y otros campos.

Velocidad de análisis: El análisis HPLC suele tardar mucho tiempo en separar y detectar las muestras, lo que puede tardar desde varios minutos hasta varias horas; La unidad de evaporador rotatorio al vacío puede evaporar muestras líquidas rápidamente en poco tiempo, normalmente solo unos minutos.

 

Conectar

 

Tratamiento de muestra: El equipo de evaporador rotatorio se utiliza a menudo para concentrar muestras o eliminar disolventes durante la preparación de muestras para que las muestras sean adecuadas para métodos de análisis adicionales, como HPLC. El efecto y la precisión del análisis HPLC se pueden mejorar concentrando la muestra y eliminando el disolvente mediante un evaporador rotatorio.

Selección de solventes: En el análisis HPLC, la elección del disolvente es muy importante para el efecto de separación; Elevaporador giratoriopuede ayudar a eliminar el disolvente de la muestra y transformar la muestra en una forma adecuada para el análisis HPLC. Por lo tanto, el evaporador rotatorio puede proporcionar condiciones de disolvente satisfactorias para el análisis de HPLC..

 

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